Jak pokazano na Figurach 3A i 3B, przewiduje się, że zastąpienie leucyny dla fenyloalaniny zapobiegnie wiązaniu leku z białkiem za pomocą przeszkody sterycznej. Aby potwierdzić, że mTORF2108L nadaje oporność na allosteryczne hamowanie mTOR, mutację F2108L wprowadzono do niezmutującego mTOR, a zmutowany cDNA ulegał stabilnej ekspresji w ludzkich komórkach embrionalnej nerki (HEK) 293T. Komórki eksprymujące mTORF2108L były znacząco bardziej oporne na hamowanie rapamycyną niż komórki eksprymujące niezmutujący mTOR (Figura 3D). Następnie badaliśmy wpływ mutanta na fosforylację endogennej kinazy S6 (S6K1), dalszego celu mTOR. Na początku, komórki eksprymujące mTORF2108L i eksprymujące nie mutujące mTOR miały podobne poziomy ufosforylowanego S6K1. Leczenie rapamycyną całkowicie zahamowało fosforylację S6K1 w komórkach eksprymujących niezmutujący mTOR, ale nie miało praktycznie żadnego działania w komórkach eksprymujących mTORF2108L (Figura 3F).
Czułość mTORF2108l na bezpośrednie hamowanie kinazy TOR
Ponieważ mTORF2108L występuje raczej w domenie FRB niż w miejscu aktywnym, postawiliśmy hipotezę, że to zmutowane białko powinno pozostać wrażliwe na hamowanie przez bezpośrednie inhibitory kinazy TOR ATP. Jak pokazano w modelu strukturalnym na Figurze 3C, nie ma przewidywanego wpływu mutacji F2108L na wiązanie toriny 1, bezpośredniego inhibitora TOR. W przeciwieństwie do komórek traktowanych rapamycyną, komórki eksprymujące mTORF2108L i eksprymujące niezmutujący mTOR były równie wrażliwe na leczenie toriną (Figura 3E). Podobnie, hamowanie fosforylacji S6K1 przez torynę było równoważne w komórkach eksprymujących mTORF2108L i wyrażających nieumaczący mTOR (Figura 3F). Podsumowując, wyniki te wskazują, że mTORF2108L pozostaje wrażliwy na bezpośrednie hamowanie kinaz.
Dyskusja
Ten raport o mutacji nonsensownej w TSC2 w guzie od pacjenta z anaplastycznym rakiem tarczycy, który miał odpowiedź na ewerolimus, potwierdza pogląd, że nowotwory różnych typów z mutacjami aktywującymi szlaki mTOR są wrażliwe na inhibitory mTOR.1-6 Raz oporność pojawiły się u tego pacjenta, mechanizm nabytej oporności na ewerolimus został zidentyfikowany jako mutacja w mTOR, która zapobiegła wiązaniu ewerolimusu z mTOR. Zmutowany mTOR pozostał wrażliwy na bezpośrednie hamowanie kinaz mTOR.
Anaplastyczny rak tarczycy jest wysoce agresywną i szybko śmiertelną chorobą, dla której nie ma odpowiedniego leczenia. Do chwili obecnej, ograniczone badania profilowania molekularnego w tej chorobie zidentyfikowały kilka ukierunkowanych zmian. Opisano onkogenne mutacje BRAF, a odpowiedź na inhibitor woskowy RAF obserwowano u pacjenta z anaplastycznym rakiem tarczycy z mutacją BRAF. 19 Dodatkowe zmiany, które można celować, obejmują mutacje w PIK3CA, PTEN, KRAS, NRAS i ALK.20,21 Genomic profilowanie anaplastycznego raka tarczycy w celu badania zmian szlaku mTOR może identyfikować podgrupy pacjentów, którzy są potencjalnymi kandydatami do włączenia do badań klinicznych terapii ukierunkowanych na mTOR
[więcej w: psychologia pracy, gdynia psycholog, psycholog poznań ]
Powiązane tematy z artykułem: gdynia psycholog psycholog poznań psychologia pracy